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固相萃取的五个步骤

2017-8-4 10:41:38      点击:

固相萃取的五个步骤
固相萃取过程要求样品以溶液形式存在,没有干扰,而且有足够的浓度以被检测。固相萃取的发展过程分为五步:


第一步选择萃取管


1.正相柱、反相柱、吸附柱:样品质量不超过填料质量的5%。


2.LC-SAX和LC-SCX柱:其吸附剂容量为0.2毫当量/克


(1毫当量=1毫摩尔的[+1]或[-1]带电荷物质)。


3.LC-NH2和LC-WCX柱:离子交换容量由应用决定。


样品基质是水溶液




带电荷
弱阴离子和酸性:LC-SAX或LC-NH2


强阴离子和酸性:要回收LC-NH2,无回收LC-SAX

弱阳离子和碱性:LC-SCX或LC-WCX
强阳离子和碱性:要回收LC-WCX,无回收LC-SCX
中性 用LC-SAX、LC-SCX除干扰物


样品基质是有机溶液


带电荷

试用反相或离子交换萃取
中性 试用反相萃取

第二步预处理萃取管


反相类型硅胶和非极性吸附剂介质,通常用水溶性有机溶剂,如


甲醇,预处理。甲醇湿润吸附剂表面和渗透键合烷基相,以允许更有


效地润湿硅胶表面。这些溶剂通常与洗脱剂一样是用于消除固相萃取


管上的杂质对分析物的干扰,


正相类型固相萃取硅胶和极性吸附剂介质通常用样品所在的有机


溶剂来预处理。


离子交换填料:对于非极性有机溶剂中的样品,用样品溶剂来预处


理。对极性溶剂中的样品,用水溶性有机溶剂来预处理。为了使固相


萃取填料从预处理到样品加入时都保持润湿,允许大约1ml的预处理


溶剂在管过滤片上。


第三步加入样品


当过量体积的水溶液被萃取时,反相硅胶填料渐渐减少预处理时所


获得的溶剂化层。这就会降低萃取效率和样品的回收率。如果回收率较


低或重现性不好,可能是分析物流失。


为使适当的化合物保留在填料上,洗脱或沉淀不要化合物,要调节


pH、盐的浓度和样品溶液在有机相中的含量。为了避免堵塞固相萃取管


的过滤片,如果可能,在萃取之前预先过滤或离心样品。


流速会影响某些化台物的保留。一般来说,对于离子交换固相萃取


管,流速小应大于2ml/min;对于其它上的固相萃取管,流速不应大于


5ml/min;如果时间不是一个确定因素的话,滴速最佳。


第四步冲洗填料


若分析物被保留在填料上,用一种不能洗脱所要化合物的溶液,去冲


洗掉不要的物质。冲洗液不超过一个管体积。


为消除不要的、可能保留很弱的物质,用比样品基质强,但其强度又


不至于洗脱分析物的的溶剂去冲洗填料。典型的溶液可含有比最后洗


液少一点的有机或无机盐,也可以调节不同的pH。与最后洗脱液完全


不同极性的纯溶剂或溶剂混合物可为有用的洗脱液(见表A)。


如果选用分析物不被保留在填料上的方案,则应用相当于一管体积的样品


溶剂去洗脱管上的分析物。在这种情况下,冲洗是作为洗脱来完成萃取过程。


第五步洗脱感兴趣的化合物


用少量能洗脱分析物的溶液去冲洗填料(一般2ml-200ml,取决于管的


大小)用两次少量液体洗脱分析物比用一次大体积更有效,当洗脱液停留在填


料上为20秒到1分钟时,分析物的回收率最好。这一步滴速是最有利的。


·对于反相、正相和离子交换过程,一般五步全都需要进行;


·对于样品净化过程,只需要前三步,并且在第三步,分析物将随着样品从


管内流出而收集,干扰杂质保留在吸附剂上。


表A常用溶剂的性质





























非极性极性